Effect of storage time and temperature of serum samples on results of screening fetal defects
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摘要:目的
研究筛查胎儿缺陷中孕期血清标本在-20℃存储条件下对检测结果的影响。
方法随机抽取2012年1月-2014年12月收集的50例血清标本为研究对象, 采用全自动时间分辨免疫分析系统检测并比较甲胎蛋白(AFP)、雌三醇(uE3)、游离人绒毛膜促性腺激素(free-β-HCG)的原始水平, 以及-20℃条件下分别保存1年、2年的复查水平。
结果血清标本AFP、uE3、free-β-hCG原始水平分别为(33.00 ±9.45) U/mL、(28.07 ±7.48) nmol/L、(4.06 ±1.52) ng/mL, -20℃保存1年后复查水平分别为(33.34 ±9.65) U/mL、(28.48 ±7.79) nmol/L、(3.99 ±1.60) ng/mL, 保存2年后复查水平分别为(33.63 ±9.50) U/mL、(27.48 ±7.72) nmol/L、(4.77 ±1.66) ng/mL, 同原始水平比, 后两年水平差异均无统计学意义(P>0.05)。2年以前、-20℃保存1年、2年后血清筛查, 胎儿缺陷临床检出率均为2.0%(1/50), 检出者为同一份样品。
结论贮存温度设置为-20℃对产前血清学标本的复检影响甚小, -20℃长期保存血清学筛查标本的方法可以接受。
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染色体异常及开放性神经管缺陷是造成孕妇流产或者患儿死亡的主要原因之一，及早发现，及早干预有助于降低其发生率，因此，产前检测血清甲胎蛋白（alpha fetal protein，AFP）、雌三醇（uE3）、游离人绒毛膜促性腺激素（free-β-HCG）三联指标成为筛查胎儿严重缺陷的主要诊断措施[1-3]。为了以备复查，保障胎儿缺陷产前筛查结果的科学性及有效性，实验室行业标准要求产前血清学标本应保存至产后2年以上[4]，但是关于标本存储温度对2年后的AFP、β-HCG、uE3检测结果之影响，尚少见报道。笔者遂于2016年10月以所在医院2年以前收集的50例孕妇血清标本为研究材料，分析标本贮存温度对筛查结果的影响，现报告如下。
1. 资料与方法
1.1 临床资料
从龙岗区第六人民医院2012年1月—2014年10月收集的中孕期孕妇的血清标本中随机抽取50例为研究材料，标本属主均为单胎孕妇，本人或者家属知情同意，年龄23 ~ 36岁，平均（29.3 ± 3.5）岁，体质量54 ~ 72 kg，平均（63.5 ± 2.5）kg，孕周为16 ~ 20周，平均（18.1 ± 1.5）周（中孕期筛查标本的孕周界定为15 ~20+6周）。排除合并心、肝、肾、脑、造血系统等严重疾病者。
1.2 方法
2年以前的血清筛查日的清晨，采集孕妇空腹肘静脉血5 mL，凝血60 min（20 ~ 25 ℃）后，以离心半径5.0 cm，4 000 r/min，离心10 min取血清；采用全自动时间分辨免疫分析系统（USA-PE-1235Auto DELFIATM，美国PE公司）检测AFP、uE3、free-β-hCG，记录结果作为原始数据保存。将血清标本-20 ℃血清标本保存2年，分别于每份血清贮存1年、2年后各取标本，采用同一仪器、同一方法对AFP、uE3、free-β-hCG进行复检。
采用SPSS 19.0统计学软件对研究数据进行分析，以χ2检验分析计数资料（以例数或者率表示），配对t检验分析计量资料（以均数±标准差表示）之间的差异，P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 -20 ℃保存1年及2年后各指标水平
50例样本中，AFP、uE3、free-β-hCG原始水平分别为（33.00 ± 9.45）U/mL、（28.07 ± 7.48）nmol/L、（4.06 ± 1.52）ng/mL。-20 ℃保存1年后，三者水平分别为（33.34 ± 9.65）U/mL、（28.48 ± 7.79）nmol/L、（3.99 ± 1.60）ng/mL，可见AFP、uE3的复查水平升高，free-β-hCG复查水平降低，但是差异无统计学意义（t = 0.643、0.782、0.106，P > 0.05）。-20 ℃保存2年后，三者水平分别为（33.63 ± 9.50）U/mL、（27.48 ± 7.72）nmol/L、（4.77 ± 1.66）ng/mL，再同原始水平相比，AFP、free-β-hCG升高，uE3降低，但差异无统计学意义（t = 0.291、0.302、0.247，P > 0.05）。
2.2 不同时间点样本胎儿缺陷临床检出率
原始样本血清筛查，以及-20 ℃保存1年、2年后样本血清筛查得出的胎儿缺陷临床检出率均为2.0%（1/50）。经核实，检出者为同一份血清样本。
3. 讨论
染色体异常（唐氏综合征、爱德华综合征等）及开放性神经管缺陷（无脑儿、显性脊柱裂等）是围产儿死亡的主要原因之一，流行病学调查[5-6]显示，染色体异常发生率高达0.2%，开放性神经管缺陷发生率高达1.0%。AFP是一种来源于胚胎卵黄囊和肝脏的糖蛋白，free-β-hCG是胎盘的滋养层细胞分泌的糖蛋白，uE3由胎儿-胎盘单位合成，这三项指标在孕妇体内水平随着孕周增加呈上升趋势，达到一定程度后再呈现下降趋势，根据三种激素在不同孕周的水平变化进行三项联合筛查是目前国内各医疗单位常用的染色体异常及开放性神经管缺陷中孕期筛查方法[7]，对于胎儿出现出生缺陷的孕妇建议给予及早引产处理，有助于改善母婴结局，因此，AFP、uE3、free-β-hCG水平的准确检测是实验室质量控制的关键[8-9]。
染色体异常及开放性神经管缺陷诊断结果的准确性需要通过产前血清学诊断和产后随访获得，对于漏检病例，需要对保存的血清标本复融后再次检测，排除由于标本检测错误导致的漏检，因此，《胎儿常见染色体异常与开放性神经管缺陷的产前筛查与诊断技术标准》[10]要求血清标本应保存至产后2年以上。目前，为了保证标本中各种物质的稳定性、复查结果与原始结果有较好的重复性，临床上对于血清标本常放置于-70 ℃长期保存[11]，但是-70 ℃医用冰箱价格昂贵、耗电量较大、样本储存数量较少，不适合基层医院或者数量较大标本（血清学筛查标本）使用。本研究结果显示：血清标本在-20 ℃保存1年、2年后AFP、uE3、free-β-hCG复查水平与原始水平比较，差异均无统计学意义（P > 0.05），提示贮存温度设置为-20 ℃对产前血清学标本的复检影响甚小，-20 ℃长期保存血清学筛查标本的方法可以接受。但是，本研究未对血清标本进行分类（低风险、临界风险、高风险）考察，临床应扩大样本量进行深入研究。
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